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                產(chǎn)品中心

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                Prominence nano

                簡要描述:蛋白組學(xué)分析,是蛋白質(zhì)分析的一項(xiàng)非常重要的技術(shù),一般會使用ESI-LCMS或者M(jìn)ALDI-TOFMS

                基礎(chǔ)信息

                產(chǎn)品型號

                廠商性質(zhì)

                代理商

                更新時(shí)間

                2024-10-25

                瀏覽次數(shù)

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                詳細(xì)介紹

                蛋白組學(xué)分析,是蛋白質(zhì)分析的一項(xiàng)非常重要的技術(shù),一般會使用ESI-LCMS或者M(jìn)ALDI-TOFMS。許多蛋白質(zhì)和肽極其微量,需要質(zhì)譜儀的高靈敏度檢測才能發(fā)現(xiàn),而這就需要一個(gè)非常穩(wěn)定的前端HPLC支持此微量檢測。

                Prominence nano系列是一套納升LC系統(tǒng),可在納升流量下進(jìn)行精準(zhǔn)流速的溶劑輸送。按照應(yīng)用不同,可以配置成1D和2D系統(tǒng)。

                Prominence nano具備納升流速下的高保留時(shí)間重復(fù)性,非常低的系統(tǒng)死體積和極低的交叉污染等特點(diǎn)。

                基本性能

                · 納升流速傳感器可保證精確的納升溶劑傳輸
                · RFC系統(tǒng)大大降低溶劑消耗
                · 低容量納升閥---保證了低的系統(tǒng)死體積
                · 高靈敏度分析

                納米輔助控制軟件的直觀操作

                · 圖形界面直觀操作
                · 可視化監(jiān)控儀器運(yùn)行狀態(tài)
                · 二維參數(shù)的便捷設(shè)置

                蛋白質(zhì)組分析的應(yīng)用

                · 高保留時(shí)間重復(fù)性
                · 二維LC的高分辨率

                納升流速傳感器可保證精確的納升溶劑傳輸

                LC-20AD nano采用了新的RFC技術(shù),可對每一個(gè)泵進(jìn)行獨(dú)立的流速控制,在納升流速下保證好的流量精度。的RFC系統(tǒng)是由高精度的納升流速感應(yīng)器控制,確保在任何時(shí)間精準(zhǔn)的流速測量。同時(shí),流量傳感器配置了精確的溫度控制機(jī)制,以減少不確定的環(huán)境因素對溶劑輸送的影響。LC-20AD nano在梯度分析能保證很好的流速穩(wěn)定性,在300nL/min時(shí)候保留時(shí)間重復(fù)性的RSD小于0.2%。

                RFC系統(tǒng)的原理


                Prominence nano

                泵內(nèi)配置了一個(gè)流速傳感器,可持續(xù)監(jiān)測泵輸出的納升流速。為了保證流速在設(shè)定的范圍內(nèi),采用反饋控制模式,傳感器的監(jiān)測到真實(shí)流速后可以自動調(diào)整分流比例,從而保證流速的準(zhǔn)確性。另外,分流后的流動相在混合前就經(jīng)過回流管路回到溶劑瓶,不會浪費(fèi)溶液。


                低溶劑消耗


                Prominence nano

                RFC系統(tǒng)可確保每個(gè)泵輸出的溶劑分流后又回到流動相瓶中。就算在高壓梯度分析中,兩種溶劑在分離后并不會像廢棄物一樣排出,從而降低溶劑消耗并減少對環(huán)境的影響。


                Prominence nano

                FCV納升閥,低死體積


                Prominence nano
                FCV nano

                FCV納升閥體積為25nL,在納升范圍內(nèi)幾乎不會展寬。在納升LC使用捕集柱進(jìn)樣和二維系統(tǒng)中,F(xiàn)CV 納升閥是的。FCV 納升閥通過使用強(qiáng)化的定子和聚醚醚酮的轉(zhuǎn)子,可以大大降低樣品的吸附,同時(shí)獲得很好的耐用性。


                高靈敏度分析


                Prominence nano
                SIL-20AC

                SIL-20AC的直接進(jìn)樣功能與FCV納升閥的低擴(kuò)射性能相結(jié)合可實(shí)現(xiàn)微量體積樣品的進(jìn)樣分析。FCV納升閥后連接的捕集柱可以對進(jìn)樣的樣品進(jìn)行捕集濃縮,從而實(shí)現(xiàn)高靈敏度分析。而且,SIL-20AC被為交叉污染的自動進(jìn)樣器,這些特征都可以滿足高靈敏度MS分析的要求。


                2維LC的輔助控制軟件

                輔助控制軟件可對2維LC進(jìn)行便捷設(shè)置,在軟件圖形界面上可輕松對2維HPLC的進(jìn)行復(fù)雜梯度編程,設(shè)定流速等,然后生成方法文件并下載至儀器中進(jìn)行控制,而圖形化的流路圖和梯度曲線代表當(dāng)前狀態(tài)。簡便的設(shè)置可避免單獨(dú)使用LC控制軟件帶來的一系列的操作問題。

                Prominence nano

                Prominence nano 2D系統(tǒng)在線的結(jié)合了離子交換和反向色譜模式(如下圖所示),每種色譜模式都獨(dú)立運(yùn)行,兩種模式的結(jié)合可進(jìn)行的分離。Prominence nano 2D系統(tǒng)可與配備Nano ESI源的LCMS系統(tǒng)聯(lián)用進(jìn)行濕法蛋白組學(xué)分析,也可以與點(diǎn)靶儀和MALDI-TOF質(zhì)譜聯(lián)用進(jìn)行干法蛋白組學(xué)分析。

                Prominence nano

                易操作的一維體系


                Prominence nano
                Nano-Assist一維LC設(shè)置圖

                1D 納升LC系統(tǒng)對于確認(rèn)SDS PAGE分離前的蛋白質(zhì)十分有效,1D系統(tǒng)只需要非常簡單的操作就可以實(shí)現(xiàn)。當(dāng)然,輔助控制軟件在1D和2D系統(tǒng)中使用都是十分方便的。


                高保留時(shí)間重復(fù)性

                蛋白質(zhì)組分析需要比較不同樣本的色譜峰差異,而樣本中又存在許多特征相似的多肽,對保留時(shí)間的重復(fù)性要求非常高。Prominence nano系統(tǒng)的高重復(fù)性可保證蛋白質(zhì)組分析的高精數(shù)據(jù),配置了RFC系統(tǒng)的LC-20AD nano可以在流速為300 nL/min獲得RSD不超過0.2% 的保留時(shí)間重復(fù)性。

                Prominence nano
                牛血清白蛋白(BSA)酶解樣品的重復(fù)性

                2維 LC的高分辨率


                Prominence nano
                牛血清白蛋白(BSA)酶解樣品的重復(fù)性

                在蛋白質(zhì)組學(xué)分析時(shí),單一的1D反相分離不足以提供足夠的色譜峰容量;所以,為了實(shí)現(xiàn)復(fù)雜樣品的分離,需要進(jìn)行2D分離以保證足夠的峰容量。Prominence nano系統(tǒng)可以進(jìn)行2D分析,結(jié)合陽離子交換和反相模式,為蛋白質(zhì)組學(xué)分析提供所需的核心技術(shù)。下圖為200fmol酵母蛋白質(zhì)的分析圖,1D分離中的未分離組分在2D中繼續(xù)分離成幾個(gè)組分,2D分離的峰容量大大大于1D所獲得的效果。


                分析條件

                一維

                PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.)

                流動相

                甲酸銨緩沖液
                濃度STEP梯度

                流速

                40 nL/min

                捕集柱

                (5 mmL.×300 ?m I.D.)
                L-column (micro)

                捕集時(shí)長

                5分鐘

                脫鹽溶劑

                水/蟻酸=100/0.1

                脫鹽流速

                L/min

                脫鹽時(shí)長

                5分鐘

                2維

                PicoFrit (100 mmL.×75 ?m I.D.)

                流動相

                梯度洗脫
                A)水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v)

                流速

                600nL/min

                溫度

                溫度

                檢測

                LCMS-IT-TOF

                樣本

                酵母蛋白中的蛋白
                (相當(dāng)于200 fmol的)

                * 分別利用1維和2維中不同類型的柱體進(jìn)行其他組合的分離模式也是可行的。在這種情況下,分離或檢測方法由于使用的移動相分離模式或類型之間的相互作用,可能會有一些限制。

                連接MALDI-TOFMS使用


                Prominence nano

                Prominence nano系統(tǒng)不僅僅可以通過nano ESI接口連接LCMS使用,還可連接到配有自動點(diǎn)靶儀的MALDI-TOFMS儀器。為了準(zhǔn)確分析MALDI靶的每個(gè)色譜峰,需要LC能夠在1nL到1µL范圍之內(nèi)精確控制流速,Prominence nano系統(tǒng)的滿足了此需要。


                Prominence nano
                酶解BSA樣品的UV色譜圖(500fmol)

                分析條件

                檢測器

                UV220 nm

                MonoCap for Fast-flow 快速M(fèi)onoCap
                (250 mmL. × 100 µm I.D.)

                流動相

                1、水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v)
                2、梯度洗脫

                流速

                1 µL/min

                溫度

                環(huán)境溫度

                捕捉柱

                ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.)

                點(diǎn)靶間隔

                12 秒的點(diǎn)斷
                每點(diǎn)液體:200nL(不包括基質(zhì))


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